Как сделать буфер TAE за несколько шагов

Буфер TAE представляет собой раствор, состоящий из основания Tris, уксусной кислоты и ЭДТА (трис-ацетат-ЭДТА). Это исторически наиболее распространенный буфер, используемый для электрофореза в агарозном геле при анализе ДНК-продуктов, полученных в результате амплификации ПЦР, протоколов очистки ДНК или экспериментов по клонированию ДНК.

Этот буфер имеет низкую ионную силу и низкую буферную способность. Он лучше всего подходит для электрофореза больших (> 20 кб) частей ДНК и его необходимо будет часто заменять или рециркулировать в течение более длительного (> 4 ч) времени гелеобразования.

Имея это в виду, вы можете рассмотреть несколько пакетов буфера.

Учитывая, что буфер прост в изготовлении, и этапы могут быть выполнены быстро, что делает более одной партии одновременно не должно быть особенно трудоемким или сложным. Используя приведенные ниже инструкции, для создания буфера TAE требуется всего 30 минут. Вот как:

Подготовить раствор для ЭДТА

Раствор EDTA (этилендиаминтетрауксусная кислота) готовят заранее. ЭДТА полностью не растворяется в растворе до тех пор, пока рН не будет доведен до примерно 8. 0. Для исходного раствора 500 мкл 0,5 М ЭДТА взвесьте 93,05 г динатриевой соли ЭДТА (FW = 372,2 ). Растворяют в деионизированной воде 400 мл и регулируют рН гидроксидом натрия (NaOH). Дополните раствор до конечного объема 500 миллилитров.

Взбейте запасной раствор TAE

Сделайте концентрированный (50x) исходный раствор TAE, взвешивая 242 г основания Триса (FW = 121. 14) и растворяя его примерно в 750 миллилитров деионизированной воды.

Тщательно добавить 57. 1 миллилитр ледяной кислоты и 100 миллилитров 0,5 М ЭДТА (pH 8. 0). После этого отрегулируйте раствор до конечного объема 1 литр. Этот исходный раствор можно хранить при комнатной температуре. PH этого буфера не регулируется и должен составлять около 8. 5.

Подготовить рабочий раствор TAE

Рабочий раствор 1x буфера TAE производится простым разбавлением исходного раствора 50 раз в деионизированной воде.

Конечные концентрации растворенного вещества составляют 40 мМ. Трис-ацетат и 1 мМ ЭДТА. Буфер готов к использованию при работе с агарозным гелем.

Что вам нужно для буфера

Поскольку для создания буфера TAE требуется только быстрый и простой набор инструкций, количество необходимых ему материалов не является чрезмерным. Вам просто понадобится динатриевая соль EDTA, база Трис и ледяная уксусная кислота.

Для создания буфера также необходимо установить pH-метр и стандарты калибровки. Вам также понадобятся 600 миллилитров и 1500 миллилитров стаканов или колб, а также градуированные цилиндры. Наконец, вам понадобится деионизированная вода, перемешать бруски и перемешать пластины.

Развертывание

Где вы планируете создавать буфер - на школьном сайте, на рабочем месте или в другом месте, например, в вашем доме?Проверьте инвентарь, прежде чем вы начнете следить за тем, чтобы у вас были все вышеупомянутые материалы для буфера TAE.

Если вам не нужно платить за материалы, рекомендуется сделать буфер за пределами вашего дома. Вы можете легко заказать материалы, которые вам нужны в Интернете, или посетить специализированный магазин для них.