Как сделать буфер TBE в 3 простых шага

Буфер TBE представляет собой буферное решение, состоящее из основания Триса, борной кислоты и ЭДТА (или Трис-бората-ЭДТА в целом). Этот буфер часто используют для электрофореза в агарозном геле при анализе продуктов ДНК, полученных в результате амплификации ПЦР, протоколов очистки ДНК или экспериментов по клонированию ДНК.

TBE-буфер особенно полезен для отделения меньших фрагментов ДНК (MW <1000), таких как небольшие продукты рестрикционных ферментов.

TBE обладает большей буферной способностью и дает более четкое разрешение, чем буфер TAE. Буфер TAE представляет собой раствор, состоящий из основания Tris, уксусной кислоты и ЭДТА (трис-ацетат-ЭДТА).

TBE, как правило, дороже, чем TAE, и ингибирует ДНК-лигазу, что может вызвать проблемы, если предназначены последующие этапы очистки ДНК и лигирования. Следуя трем простым шагам, узнайте, как сделать буфер TBE. Для создания этого буфера не требуется больше 30 минут. Вот как:

Приготовить раствор для ЭДТА

Перед тем, как приготовить раствор ЭДТА (этилендиаминтетрауксусной кислоты), следует заранее подготовить. ЭДТА не будет полностью растворяться до тех пор, пока рН не будет доведен до примерно 8. 0. Для исходного раствора 500 мкл 0,5 М ЭДТА взвесьте 93,05 г динатриевой соли ЭДТА (FW = 372. 2). Затем растворите его в 400 миллилитрах деионизированной воды и отрегулируйте pH с помощью NaOH. После этого долейте раствор до конечного объема 500 миллилитров.

Подготовьте раствор для хранения TBE

Сделайте концентрированный (5x) исходный раствор TBE путем взвешивания 54 г основания Tris (FW = 121. 14) и 27. 5 г борной кислоты (FW = 61. 83) и растворяют как примерно 900 миллилитров деионизированной воды. Затем добавьте 20 мл 0,5 М ЭДТА (pH 8,0) и отрегулируйте раствор до конечного объема 1 литр.

Этот раствор можно хранить при комнатной температуре, но в старых растворах образуется осадок. Храните буфер в стеклянных бутылках и отбрасывайте, если образуется осадок.

Подготовьте рабочее решение TBE

Для электрофореза в агарозном геле можно использовать буфер TBE при концентрации 0,5 × (разведение концентрата 1: 10). Разбавьте исходный раствор на 10 раз в деионизированной воде. Конечные концентрации растворенного вещества составляют 45 мМ Трис-бората и 1 мМ ЭДТА. Буфер готов к использованию при работе с агарозным гелем.

Что вам нужно

Чтобы сделать буфер TBE, вам понадобится всего четыре вещества. Остальные предметы в этом списке - это оборудование. Необходимыми четырьмя веществами являются динатриевая соль EDTA, основание Триса, борная кислота и деионизированная вода.

Что касается оборудования, вам понадобятся стандарты pH и калибровочные стандарты. В дополнение к этому вам понадобятся 600-миллилитровые и 1500-миллилитные стаканы или колбы. Завершение потребностей в вашем оборудовании - это градуированные цилиндры, мешалки и перемешивающие пластины.

Проверьте инвентарь в лаборатории, которую вы будете использовать, чтобы убедиться, что у вас есть все, что вам нужно, прежде чем приступать к работе. Ничто не хуже, чем останавливаться в середине подготовки решения, потому что у вас закончились правильные материалы.

Если ваша лаборатория находится в школе или на вашем рабочем месте, обратитесь к соответствующему персоналу, чтобы убедиться, что у них есть все предметы на складе. Это может сэкономить ваше время и энергию в конце.