Как заморозить-высушить бактериальную культуру (лиофилизация)

Сушка вымораживанием, также называемая лиофилизацией или криодезикацией, представляет собой процесс удаления воды из продукта после его замораживания (а затем помещается под вакуумом), позволяя льду сместиться из твердого вещества в пар, без прохождения жидкой фазы. Лед (или другие замороженные растворители) удаляются из продукта через процесс сублимации, и молекулы связанной воды удаляются в процессе десорбции.

Основы лиофилизации

Одним из лучших способов хранения бактериальной, грибковой, дрожжей или другой культуры микроорганизмов в течение длительного времени является использование процесса лиофилизации. Эта короткая лабораторная процедура может быть проведена с любой имеющейся в продаже лиофилизатором, которая сохранит вашу коллекцию культур. Поскольку лиофилизация является наиболее сложной и дорогостоящей формой сушки, процесс обычно ограничивается деликатными теплочувствительными материалами высокой ценности. Вещества, которые не повреждаются при замораживании, обычно могут быть лиофилизированы, так что холодильное хранилище не требуется.

Этот процесс может занять всего три часа и до 24 часов, не считая времени роста культуры.

Пошаговый процесс лиофилизации

1. Сначала выращивайте ночную культуру или лужайку микроорганизма на LB или другой подходящей питательной агаровой пластине.

2. Далее, заранее подготовьте стерильные пробирки для обжатия с помощью автоклавирования с крышками (резиновые пробки), расположенными свободно сверху. Поместите бумажные этикетки, напечатанные с идентификацией культуры внутри труб перед автоклавированием. Альтернативно, используйте трубки с колпачками, предназначенными для стерильности.

3. Добавить 4 мл лиофилизационного буфера к пластине. При необходимости клетки можно подвешивать, используя стерильный стеклянный стержень.

4. Быстро перенесите культуральную суспензию в стерилизованные флаконы. Добавьте приблизительно 1. 5 мл на флакон. Уплотнить резиновым колпачком.

5. Замораживайте культуральную суспензию внутри флаконов, помещая флаконы в морозильник Celzius -20 градусов.

6. После того, как культуры замораживаются, подготовьте сублимационную сушилку, включив ее и позволяя стабилизировать условия для условий температуры и вакуума. Сделайте это в соответствии с инструкциями производителя для конкретной марки морозильной камеры, которую вы используете.

7. Осторожно и асептически размещайте колпачки флаконов на флаконах сверху, чтобы в процессе сушки вымораживалась влажность, и помещали флаконы в камеру для замораживания. Нанесите вакуум на камеру в соответствии с инструкциями производителя.

8. Позвольте времени культуры полностью лиофилизировать (высушить). Это может занять от нескольких часов до ночи, в зависимости от объема каждого образца и количества образцов, которые у вас есть.

9. Извлеките образцы из камеры замораживания в соответствии с инструкциями изготовителя и немедленно запечатайте флаконы резиновыми колпачками, а затем обжимными наконечниками.

10. Хранить лиофилизированную коллекцию культуры при комнатной температуре.

Продукты, которые вам понадобятся

• Морозильная камера
• Питательные или другие подходящие пластины для агара (и инкубатор для выращивания культуры)
• Стеклянный стержень
• Лиофилизационный буфер
• Пробирки для обжатия с резиновыми пробками (и зажим для нанесения колпачков)
• Морозильник

_{Ссылка:
SP Scientific. Основные принципы сублимационной сушки. // www. spscientific. ком / сублимационной сушки лиофилизации-основы /}