Как сделать фосфатный буферный солевой раствор (PBS)

PBS (забуференный фосфатом физиологический раствор) является обычно используемым буфером для иммуногистохимического окрашивания и обычно используется в биологических исследованиях. Концентрация осмолярности и ионов растворов соответствует концентрации человеческого тела (изотонической).

PBS представляет собой раствор на водной основе, содержащий гидрофосфат натрия, хлорид натрия и, в некоторых случаях, хлорид калия и дигидрофосфат калия.

Иммунофлуоресцентное окрашивание для IHC

Иммунофлуоресцентное окрашивание было первым методом иммуногистохимического (IHC) окрашивания. С основанием реакции связывания антиген-антитело антигены становятся видимыми с использованием флуоресцентных красителей при конъюгировании с антителами. Процесс происходит, когда активируется возбуждающим светом определенной длины волны под флуоресцентным микроскопом. Иммуногистохимия относится к процессу обнаружения антигенов (например, белков) в клетках тканевой секции с использованием принципа антител, специфически связывающихся с антигенами в биологических тканях.

Использование забуференного фосфатом солевого раствора (PBS)

Забуференный фосфатом физиологический раствор имеет много применений, поскольку он изотоничен и не токсичен для большинства клеток. Его можно использовать для разбавления веществ и используется для промывания контейнеров, содержащих клетки. PBS можно использовать в качестве разбавителя в методах сушки биомолекул, поскольку молекулы воды внутри него будут структурированы вокруг вещества (например, белка), чтобы его «высушивали» и иммобилизовали до твердой поверхности.

Тонкая пленка воды, которая связывается с веществом, предотвращает денатурацию или другие конформационные изменения. Карбонатные буферы могут использоваться с той же целью, но с меньшей эффективностью. PBS также может использоваться для получения эталонного спектра при измерении адсорбции белка в эллипсометрии.

Приготовление PBS

Существует много разных способов приготовления PBS.

Некоторые формулы не содержат калия, в то время как другие содержат кальций или магний. Рецепт буфера ниже, который относительно прост, для 10X исходного раствора PBS (0,1 М). Также предоставляется возможность добавления Tween. Весь процесс занимает около 10 минут.

Как сделать фосфатный буферный солевой раствор (PBS)

1. Взвесьте следующее: 10. 9 г безводного двухосновного фосфата натрия (Na2HPO4), 3,2 г безводного фосфата натрия одноосновного (NaH2PO4) и 90 г хлорида натрия (NaCl).
2. Растворить все вышеперечисленное только в 1 л дистиллированной воды.
3. Отрегулируйте значение pH до 7. 4.
4. Сделайте раствор до конечного объема 1 л.
5. (необязательно). Для раствора, содержащего 0,5% Tween 20, добавьте 5 мл Tween 20 в раствор 1L.
6. Разбавьте 10X перед использованием и при необходимости отрегулируйте pH.

Советы по созданию буфера PBS

• Хранить при комнатной температуре.
• Небедренные реагенты могут быть замещены, но вам придется пересчитать соответствующую массу каждого, чтобы разместить молекулы добавленной воды.

Что вам нужно для создания буфера PBS

• Однофазный фосфат натрия (безводный)
• Двухосновный фосфат натрия (безводный)
• Натрий хлорид
• Масштаб и весовые лодки
• Магнитная мешалка и мешалка > pH-зонд, калиброванные и подходящие растворы для регулирования рН
• 1 л мерной колбы
• Tween 20 (необязательно)