Важность удельной активности в выделении белка

Удельная активность - это термин, используемый для измерения скорости реакции фермента с субстратом.

Специфическая активность фермента (короткая удельная активность) является мерой чистоты фермента и цитируется как единицы / мг . Значение становится больше, поскольку препарат фермента становится более чистым, поскольку количество белка (мг) обычно меньше, но скорость реакции остается одинаковой (или может увеличиваться из-за уменьшения интерференции или удаления ингибиторов).

Специфическая активность: количественная кинетика фермента

В некотором роде ферменты представляют собой белки, которые действуют как катализаторы для уменьшения количества энергии активации для реакции. Энергия активации - это энергия, необходимая для того, чтобы реакции начинались, поскольку многие реакции происходят не очень быстро (или вообще возникают), если они термодинамически возможны.

Ферменты катализируют специфические реакции на определенном участке (известном как активный сайт), где реагенты связывают и реагируют на получение продуктов. Субстраты имеют активные участки, которые являются специфическими только для них, так что никакие другие вещества не связываются или не реагируют на одном и том же участке. Как блокировка и ключ, каждый фермент будет катализировать только одну конкретную реакцию (за некоторыми исключениями).

Специфическая активность используется в методах выделения белка, чтобы указать процент очистки. Важно знать этот аппарат при покупке ферментов, чтобы точно указать, сколько чистого фермента вы получаете.

При измерении кинетики фермента (скорость реакции фермента с субстратом или поверхностью) удельную активность определяют как количество субстрата, который преобразует фермент (катализируемые реакции), в расчете на мг белка в препарате фермента за единицу времени.

Примером специфической активности может быть:

Специфическая активность выделенного фермента была измерена до 150 мкмоль / мин / мг белка перед очисткой и 800 мкмоль / мин / мг после очистки.

Удельная активность является важной мерой чистоты фермента. Различные партии чистого фермента должны иметь одинаковые значения и даже разбавлять раствор фермента во много раз будут иметь идентичные значения удельной активности, даже если будут разные значения активности фермента. Это связано с тем, что при расчете удельной активности числитель (единицы / мл) и знаменатель (мг / мл) одинаково влияют.

• Конкретная активность сильно отличается от активности, но расчет удельной активности по-прежнему зависит от величины активности. Это означает, что указанное значение удельной активности также будет зависеть от определения единицы фермента.

Партии ферментов, которые имеют более низкую, чем ожидалось, удельную активность, могут содержать молекулы фермента, которые были изменены или смешаны с примесями.

Факторы, влияющие на активность фермента

Возможно, что один фермент может иметь разные измеренные значения активности при измерении в разных лабораториях (то есть реальные различия в измеренной активности, а не очевидные различия, вызванные использованием разных определений единиц).

Способ проведения анализа (метод тестирования для определения чистоты ферментов) будет влиять на данные о зарегистрированных показателях активности. Например, ферменты обычно более активны между температурами 37 градусов Цельсия по сравнению с 20 градусами Цельсия, поэтому, если анализ проводится при 21 градус Цельсия, значения будут отличаться от анализов, проводимых при температуре 32 градусов Цельсия (обычно , анализы проводят при температуре от 20 до 37 градусов Цельсия).

Таким образом, определение единицы фермента было бы лучше выражено как: 1 единица (U) представляет собой количество фермента, которое катализирует реакцию 1 нмоль субстрата в минуту в стандартных условиях.