RFLP: определение и его использование в решении ДНК-загадок

Полиморфизм длины фрагмента рестрикции (RFLP) - это молекулярный метод генетического анализа, который позволяет идентифицировать людей на основе уникальных закономерностей рестрикционного ферментации в определенных областях ДНК.

Также известный как RFLP Analysis, этот метод использует преимущества полиморфизма в генетических кодах отдельных людей. Несмотря на то, что все члены вида имеют по существу один и тот же генетический состав, эти незначительные различия объясняют вариации фенотипа, такие как внешний вид или обмен веществ, между индивидуумами.

RFLP: Методика анализа и приложения

Метод анализа RFLP включает в себя разрезание определенной области ДНК с известной изменчивостью с рестрикционными ферментами, затем разделение фрагментов ДНК электрофорезом на основе агарозного геля и определение количества фрагментов и относительных размеров.

Рестрикционный фермент представляет собой фермент, молекулу белка, которая режет ДНК на сайтах рестрикции. В сущности, образец ДНК разрушается и расщепляется рестрикционными ферментами. Полученные фрагменты разделяют в соответствии с их длиной, и структура размеров фрагментов будет отличаться для каждого испытуемого.

Для полного процесса RFLP требуется маркировка зонда, фрагментация ДНК, электрофорез, блоттинг, гибридизация, промывка и авторадиография. Обнаруженный RFLP визуализируется с использованием рентгеновской пленки в авторадиографии, где фрагменты ДНК можно рассматривать и анализировать после того, как они отделены друг от друга электрофорезом.

Некоторые из приложений для анализа RFLP включают:

• отпечаток ДНК . Судебные ученые могут использовать анализ RFLP для выявления подозреваемых на основе образцов доказательств, собранных в сценах преступлений.
• отцовство. RFLP также используется при определении отцовства или для отслеживания происхождения.
• Генетическое разнообразие. Методика может быть использована при изучении эволюции и миграции дикой природы, изучении закономерностей размножения в популяциях животных и выявлении и диагностике некоторых заболеваний.

Метод использования RFLP-обнаружения вариации геномов является важным инструментом в картировании генома и анализе генетических заболеваний.

Если местоположение определенного гена болезни изыскивается в определенной хромосоме, тогда исследователи будут анализировать ДНК членов семейства с этим заболеванием, а затем искать аналогичные закономерности наследования в аллелях RFLP. Как только ген болезни локализуется, проведение анализа RFLP на других членах семьи может выявить носитель мутантных генов или сигнализировать общий риск заболевания.

Важно отметить, что метод RFLP широко не используется в настоящее время, когда более новые, более надежные методы используются для анализа ДНК в судебной медицине и в нескольких других областях.

Отрицательный аспект анализа

К сожалению, метод анализа RFLP является утомительным и медленным. Помимо того, что требуется большое количество ДНК-образца, образец обычно должен иметь размер четверти, который относительно большой для образцов ДНК. Процесс, от маркировки зонда до стирки и авторадиографии, может принимать до полный месяц для завершения.

Результаты проекта генома человека в значительной степени заменили потребность в RFLP. Проект позволил определить всю последовательность ДНК, обнаруженную в клетках человека, геноме человека, и для идентификации всех генов в геноме человека.